Técnicas de purificación y ruptura de quistes de Giardia spp / Purification and breaking techniques of cysts of Giardia spp

El objetivo de este trabajo fue optimizar y evaluar las técnicas de purificación, aislamiento y ruptura de quistes de Giardia spp a partir de heces formoladas para la obtención de ADN. La materia fecal filtrada fue sometida a 3 técnicas de purificación, utilizando soluciones de formol-éter, sacarosa y formol-éter más sacarosa. La solución de sacarosa permitió aislar los quistes con menos detritos. Los quistes purificados fueron tratados con 3 técnicas para la ruptura de los mismos: shock osmótico y calor, degradación química y shock térmico, acción enzimática y efecto mecánico. Solamente con la técnica de shock térmico, acción enzimática y efecto mecánico se observaron bandas fluorescentes en geles de agarosa. Los resultados de este trabajo permiten contar con una metodología de rutina, simple, que podría ser usada en los pasos previos a la técnica de PCR para la genotipificación de este parásito.

The purpose of this study was to optimize and evaluate the purification techniques, isolation and breaking of cysts of Giardia spp from fecal samples to isolate DNA. Filtrated fecal samples were tested in 3 purification techniques: Telleman solution, sucrose and Telleman plus sucrose. The sucrose solution let us to isolate the cysts with less detritus. The cleaned cysts were splited in 3 techniques to test the breaking: osmotic shock and heat, chemistry degradation and thermic shock, enzymatic action and mechanic effect. Only the last method was successful and showed bands in agarose gel. The result of this study shows a routine and common method which could be used in the previous steps to the PCR technique for the genotypification of these parasites.

Aislamiento y caracterización de coliformes injuriados provenientes de la red de distribución de agua de bebida de La Plata, Argentina / Isolation and characterization of injured coliforms from the drinking water distribution network of La Plata, Argentina

We screened the La Plata drinking water distribution network for fecal and total coliform bacterial indicator by purification procedures, cultivating 66 membrane-filtered samples from the two networks on m-T7 agar. Subterranean and river-derived water yielded 13 and 18 confirmed gram-negative bacillus isolates, with 54 and 72 representing total coliforms, respectively. Those from the former source were Klebsiella oxytoca, Enterobacter agglomerans, and Enterobacter aerogenes and from the latter Klebsiella oxytoca, Enterobacter agglomerans, and Enterobacter cloacae, genomic group 3. Since 58 of the samples were positive using m-T7 medium it is suggested that the inclusion in standard quality control protocols should be implemented.

Relación entre el gradiente discontinuo de sacarosa y la viabilidad de ooquistes de Cryptosporidium sp / Relationship between discontinuous sucrose gradient and viability of Cryptosporidium sp. oocysts

Cryptosporidium sp. causes self-limiting gastroenteritis in immunocompetent individuals and can produce a life-threatening chronic diarrhea in immunodeficient patients. In order to obtain populations of selectively infective oocysts for inoculation in biological experiments, we developed an operational protocol for the enrichment of viable oocysts from crude fecal material. Using either fresh or formaldehyde-fixed feces as sources of viable and nonviable oocysts, respectively, we fractionated the samples on parallel discontinuous sucrose gradients and evaluated oocyst viability at different banding densities by an in vitro excystation assay. The formaldehyde-inactivated fecal samples formed no bands after centrifugation and 91.66 of the oocysts became concentrated in the pellet. Fresh fecal samples formed three bands at densities 1.062, 1.092, and 1.121, in addition to a sediment. Here the viability of the gradient-sedimented oocysts was 92.3 overall, and of those in the second band 100. Modifications in oocyst permeability thus seems to alter their sedimentation characteristics so that consequent distribution on sucrose gradients can be correlated with oocyst viability. Discontinuous sucrose density gradient sedimentation would thus constitute a simple and rapid mean to obtain viable oocysts for use in biological models both in vivo and in vitro.

Factores que influyen en el desenquistamiento in vitro de Cryptosporidium sp / Factors affecting the in vitro excystation of Cryptosporidium sp

Para evaluar la viabilidad de los ooquistes de Cryptosporidium sp se desarrolló y optimizó una técnica de desenquistamiento in vitro. Los ooquistes de Cryptosporidium sp se obtuvieron de una muestra de materia fecal de un niño con cryptosporidiosis sintomática. La muestra fue procesada por la técnica de gradiente discontinuo de sacarosa hasta obtener una suspensión de ooquistes purificados y concentrados (OPC). Los ooquistes se cuantificaron en cámara de Neubauer y preservaron en PBS pH 7, 2 a 4§C. Los dos protocolos ensayados a partir de alícuotas de 100µl de OPC con 178.000 ooquistes/mm3 fueron: I. Tratamiento con bilis 1 por ciento y bicarbonato de sodio al 0,44 por ciento a 37§C durante 24 horas. II Tratamiento con bilis 1 por ciento con pH 6 y pH 8, con y sin bicarbonato de sodio al 0,44 por ciento, con y sin incubación en atmósfera de 10 por ciento de CO2 durante 24 h a 37§C. Se evaluó el grado de desenquistamiento en todos los grupos efectuando el conteo de ooquistes intactos en cámara de Neubauer. La preincubación con tripsina no incrementó el desenquistamiento de los ooquistes de Cryptosporidium sp. Las mejores condiciones de desenquistamiento fueron utilizando bilis al 1 por ciento pH 8, incubado con 10 por ciento de CO2, a 37§C durante 24 h.

Evolución alejada en portadoras asintomáticos HBsAg(PA-HBsAg) en un área de baja prevalencia de hepatocarcinoma

Data provided by 51 voluntaru blood donnors identified as asymptomatic HBsAg carriers five to ten years (x = 7.5 years) before their inclusion in the study are analysed towards their long-term evolution. HBsAg clearance was estimated 2.5% yearly and 83.9% of those remaining positive showed the classical non-replicative serological pattern,; another 12.9% were negative for both HBeAg - Anti HBe (serovonversion window?), one of them presenting raised ASATALAT levels and enhanced histological activity (lobular chronic hepatitis). Neither alpha-fetoprotein seric levels (RIA) nor liver ultrasonography demonstrated hepato cellular carcinoma suspicion signs in 35 HBsAg positive cases to this methods; ASAT-ALAT levels raised over two fold the normal superior limit ion only 11.4%, and neither agressive chronic liver disease nor hepatocyte dissplasia was showed in 17 biopsed cases (70.6% normal; 23.6% chronic reactive or chronic persistent hepatitis; 5.8% chronic liobular hepatitis). One out of five patients biopsed with a seven years interval showed histologic worsening

Prevalencia de infección por virus B en odontologos del Distrito I de la Provincia de Buenos Aires

Se analizaron dos muestras, la primera de 250 odontólogos extaidos de un universo compuesto por 1500 dentistas del Distrito 1 de la Provincia de Buenos Aires y otra de 31 estudiantes, tomados de los 180 que cursaron el último año de la carrera de Odontología dela U.N.L.P. En la muestra de odontólogos se halló, mediante la determinación de anti HBc por enzimo-inmuno-ensayo (E.L.I.S.A.), una prevalencia de infeccion por HBV de 9.6%. Esta prevalencia es significativamente superior a la de la población general (5.8%), con lo cual se demuestra por primera vez en nuestro medio, que estos profesionales constituyen también población de alto riesgo. La prevalencia hallada en los estudiantes (6.4%) no fue significativamente diferente a la de la población general. La prevalencia de anti HBc hallada en cada uno de los servicios considerados, se correlacionó en forma directamente proporcional con el número de pacientes asistidos diariamente. Se constató que las medidas de prevención y esterilización para el HBV eran inadecuadas. No se comprobó ninguna asociación entre determinado patrón de HLA y los distintos perfiles serológicos

Hepatitis no A - no B: significación epidemiológica en hepatitis viral aguda y hepatitis crónica activa de consulta hepatológica / Hepatitis non-A, non-B: epidemiological significance in acute viral hepatitis and chronic active hepatitis of hepatological consultation

1- La hepatitis aguda NANB representa en nuestro medio 31.2% de las hepatitis virales agudas; si bien estos porcentajes no son directamente transpolables a la población general, el especialista gastroenterólogo o hepatólogo, debe esperar que casi 1 de cada 3 pacientes de su consulta presente una hepatopatía con multitud de aspectos aun desconocidos, etiológicos, evolutivos, vinculación con el cáncer hepático, etc. 2- El predominio de la hepatitis aguda a HAV es neto en la infancia (0-9 años: 72.2%) y excepcional después de los 40 años, mientras que el HBV es etiología predominante por encima de los 50; los NANBV se presentan en todas las edades, con 77,6% de los casos entre 20-49. 3- Al no incluirse casos sub-clínicos post-transfusionales, generalmente provenientes de estudios de seguimiento, el porcentaje de forma agudas NANB presuntamente esporádicas es elevado (71.5%), aunque no debiera descartarse la posibilidad de acción en nuestro medio de formas de transmisión no-parenteral. 4- 25% de nuestra serie de hapatitis crónicas activas, es atribuido por exclusión a la etiología NANB, englobando posiblemente a otras causas aun no conocidas. 5- Estos aspectos epidemiológicos, así como otros clínico-evolutivos, variarán seguramente en los próximos años gracias a los esfuerzos realizados por investigadores de todo el mundo en la identificación etiológica y la puesta a punto de marcadores serológicos específicos de los hoy denominados virus de la hepatiti No A- No B

Antigenos HLA donantes de sangre portadores cronicos asintomaticos del antigeno de superfice (HBsAg) de la hepatitis viral tipo B. / HLA antigens in blood donors asymptomatic chronic carriers of hepatitis type B surface antigen (HBsAg)

La relacion entre los antigenos de histocompatibilidad del sistema HLA y la incidencia de positividad para el antigeno de superficie del virus de la hepatitis tipo B (HBsAg) ha sido estudiada por diversos investigadores en 3 grupos principales de individuos: a) pacientes con hepatitis cronica activa; b) pacientes con insuficiencia renal cronica, y c) portadores cronicos asintomaticos del HBsAg. Nuestro estudio se efectuo en 37 portadores cronicos asintomaticos del HBsAg, todos ellos donantes de sangre, en su mayoria hombres, en los cuales la presencia de HBsAg fue confirmado por radioinmunoensayo durante un ano como minino.Se utilizaron como grupo control normal, 257 personas de ambos sexos, blancos, sin relacion de parentesco. Se calculo el riesgo relativo que posee un individuo de ser portador de HBsAg segun la presencia de un determinado antigeno de histocompatibilidad. Se estudiaron 13 antigenos del locus A, 15 del locus B y 4 del locus C. Se encontro un aumento estadisticamente significativo en la frecuencia de los antigenos del locus B, el B 15 y el Bw21. Si se multiplica el valor p obtenido por el numero de antigenos estudiados (32), para obtener el valor corregido, solo la presencia aumentada del alelo Bw21 conserva su significado estadistico (p corrigido = 0,03). Aumentos en las frecuencias de los antigenos B15 y Bw21 han sido senalados tambien por otros autores

Estudio serologico y comparacion de las tecnicas de deteccion del virus de la hepatitis B en hepatopatias agudas y cronicas. / Serologic study and comparison of the detection technics of hepatitis B virus in acute and chronic liver disease

Se estudiaran 143 pacientes, de los cuales 100 presentaron hepatitis viral aguda (HVA), 8 tuvieron hepatitis viral persistente (HVP), 13 hepatitis cronica agresiva (HCA) y 22 cirrosis. La incidencia del antigeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg) por distintas tecnicas fue la siguiente: HVA, 25% por inmunodifusion (ID), 35% por contrainmunoelectroforesis discontinua (CIED) y 52% por radioinmunoensayo (RIA); en HCA, 31% por ID, 46% por CIED y 100% por RIA; en las cirrosis, 27% por ID, 32% por CIED y 63% por RIA. La incidencia del anticuerpo contra el HBsAg (anti-HBs) fue en HVA 0% por ID, 1% por CIED y 12% por RIA; en HVP, 0% por ID y CIED y 60% por RIA; en HC 0% por ID y CIED y 15% por RIA; en cirrosis, 0% por ID y CIED y 32% por RIA. Es indudable la mayor sensibilidad del RIA com respecto a la ID y a la CIED. Se considera al RIA como la tecnica de eleccion para el seguimiento de los pacientes. Se detectaron los marcadores del virus de la hepatitis B(HBsAg y anti-HBs) en distintos momentos de la evolucion de HVA y HVP. Se discute la relacion entre dichos marcadores y las formas evolutivas de las hepatopatias